試劑檢查：使用前需仔細檢查試劑盒各組分的包裝是否完好，是否在有效期內(nèi)。若發(fā)現(xiàn)試劑出現(xiàn)渾濁、變色、結(jié)塊等異?，F(xiàn)象，切勿使用，避免影響凝膠質(zhì)量和實驗結(jié)果。例如，預(yù)混試劑若出現(xiàn)明顯沉淀，可能導(dǎo)致凝膠聚合不均勻，影響蛋白質(zhì)分離效果。

器具清潔：確保所有用于凝膠制備的器具，如容器、移液槍、攪拌棒等，均經(jīng)過嚴格清洗和干燥處理。殘留的雜質(zhì)、油污或其他化學物質(zhì)可能干擾凝膠聚合反應(yīng)，或在電泳過程中影響蛋白質(zhì)遷移，導(dǎo)致條帶異常。例如，未洗凈的容器可能含有微量金屬離子，影響聚丙烯酰胺的聚合。

嚴格遵循配比：務(wù)必按照試劑盒說明書規(guī)定的比例，準確加入去離子水或緩沖液與預(yù)混試劑混合。試劑比例不當會直接影響凝膠濃度、交聯(lián)度和緩沖能力，進而改變凝膠孔徑大小和電泳性能。如加水過多會使凝膠濃度降低，蛋白質(zhì)遷移速度加快，條帶分辨率下降；加水過少則凝膠過硬，蛋白質(zhì)難以進入凝膠，出現(xiàn)條帶拖尾或無法分離的情況。

充分均勻混合：混合過程中，應(yīng)確保試劑充分溶解和均勻分散。可使用移液槍反復(fù)吹打或攪拌棒輕柔攪拌，但要避免劇烈攪拌產(chǎn)生大量氣泡。氣泡的存在不僅會在凝膠中形成空洞，影響凝膠的均勻性和完整性，還可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)樣品在電泳時遷移路徑改變，造成條帶變形。若不慎產(chǎn)生氣泡，可將混合液靜置片刻，待氣泡自然排出后再進行灌注。

避免氣泡殘留：灌注凝膠溶液時，動作要平穩(wěn)迅速，盡量減少溶液與空氣的接觸，防止氣泡進入凝膠腔?？蓪⑷萜鲀A斜，使溶液沿電泳槽壁緩慢流入，若發(fā)現(xiàn)凝膠腔內(nèi)有氣泡，可用細針小心挑破排出。殘留氣泡會在凝膠中形成不規(guī)則孔洞，阻礙蛋白質(zhì)遷移，使條帶出現(xiàn)斷裂或缺失。

控制聚合條件：凝膠聚合過程受溫度、濕度等環(huán)境因素影響較大。應(yīng)將灌注好的凝膠置于適宜的環(huán)境中進行聚合，一般建議在室溫（20 - 25℃）下靜置，避免溫度過高或過低。溫度過高會使凝膠聚合速度過快，導(dǎo)致凝膠孔徑不均勻；溫度過低則聚合時間延長，甚至可能無法聚合。同時，要保持環(huán)境干燥，潮濕環(huán)境可能使凝膠吸收水分，影響其理化性質(zhì)。

正確拔取梳子：待凝膠聚合后，小心拔取梳子。拔梳時應(yīng)垂直向上緩慢用力，避免晃動或傾斜，防止破壞加樣孔的形狀和完整性。加樣孔受損會導(dǎo)致樣品在加樣時溢出或分布不均，影響電泳結(jié)果的準確性。

合理保存剩余試劑：試劑盒未使用完的試劑應(yīng)按照要求密封保存，置于規(guī)定的溫度環(huán)境中（通常為 4℃或 -20℃）。避免試劑長時間暴露在空氣中，防止其吸濕、氧化或被微生物污染。對于含特殊成分（如聚合加速劑）的試劑，更要注意保存條件，防止其活性喪失，影響后續(xù)使用效果。